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NEB qPCR、RT-PCR、RT-qPCR 試劑
——反轉(zhuǎn)錄酶/逆轉(zhuǎn)錄酶、預(yù)混液、試劑盒

 
北京澤平代理美國(guó)進(jìn)口NEB（New England Biolabs）公司各類逆轉(zhuǎn)錄酶（反轉(zhuǎn)錄酶）、預(yù)混液、反轉(zhuǎn)錄試劑盒（逆轉(zhuǎn)錄試劑盒），提供Protoscript II 反轉(zhuǎn)錄酶、M-MuLV反轉(zhuǎn)錄酶、AMV逆轉(zhuǎn)錄酶、LunaScript反轉(zhuǎn)錄試劑盒等，用于cDNA合成、RT-PCR、一步法RT-qPCR、兩步法RT-qPCR、常規(guī)qPCR，適用于染料法、探針?lè)?/strong>檢測(cè)。NEB逆轉(zhuǎn)錄酶具備更高熱穩(wěn)定性、更強(qiáng)持續(xù)合成能力、擴(kuò)增速度快、抑制劑耐受能力強(qiáng)，可用于高GC含量、復(fù)雜結(jié)構(gòu)模板，應(yīng)用于RNA直接測(cè)序、長(zhǎng)片段cDNA測(cè)序、RT-LAMP等。

NEB qPCR、RT-PCR、RT-qPCR 試劑代理商北京澤平

一、LunaScript反轉(zhuǎn)錄試劑盒（Luna反轉(zhuǎn)錄酶）——RT-qPCR、擴(kuò)增子測(cè)序

1、NEB Luna反轉(zhuǎn)錄酶（Luna逆轉(zhuǎn)錄酶），作為RNA依賴型DNA聚合酶，耐高溫能力強(qiáng)，酶活性溫度為55℃~65℃，適用于高GC含量、復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)模板；持續(xù)合成能力強(qiáng)，具備很強(qiáng)的單次連續(xù)添加核苷酸的能力，可在非常短的時(shí)間內(nèi)合成更長(zhǎng)的cDNA鏈；提供多種預(yù)混液、試劑盒形式，用于不同模板來(lái)源的染料法、探針?lè)≧T-qPCR檢測(cè)。

·快速：反應(yīng)時(shí)間非常短，<15min；
·耐高溫：55℃~65℃，適用于困難模板；
·穩(wěn)定：反轉(zhuǎn)錄酶預(yù)混液在25℃放置15天活性不損失；
·便捷：提供不同劑型、預(yù)混液，使用方便；
·可見(jiàn)：添加無(wú)干擾藍(lán)色示蹤染料，避免加樣失誤。
 

2、NEB LunaScript反轉(zhuǎn)錄SuperMix試劑盒 (逆轉(zhuǎn)錄試劑盒，LunaScript RT SuperMix Kit，貨號(hào)E3010) 包含優(yōu)化的反轉(zhuǎn)錄預(yù)混液、No-RT對(duì)照、無(wú)核酶水，可用于cDNA第一鏈合成、擴(kuò)增子測(cè)序、兩步法RT-qPCR。LunaScript預(yù)混液含有熱穩(wěn)定Luna反轉(zhuǎn)錄酶，可在更高溫度下合成cDNA；提供小鼠RNase抑制劑，保護(hù)模板RNA不被降解；含有隨機(jī)六聚體引物、poly-dT引物，可均勻覆蓋整個(gè)RNA靶標(biāo)；含有藍(lán)色染料，可在兩步法RT-qPCR起到示蹤作用；樣品起始量從高達(dá)1µg，到低至單拷貝RNA，均能得到穩(wěn)健、線性和靈敏的檢測(cè)結(jié)果。

·適合目標(biāo)長(zhǎng)度≤3kb的cDNA；
·單管預(yù)混液，含隨機(jī)六聚體引物、oligo-dT引物、dNTP、小鼠RNase抑制劑以及Luna反轉(zhuǎn)錄酶；
·15min內(nèi)即可完成cDNA第一鏈合成；
·熱穩(wěn)定Luna反轉(zhuǎn)錄酶大大改善實(shí)驗(yàn)表現(xiàn)；
·含無(wú)干擾、可視化藍(lán)色示蹤染料，減少加樣錯(cuò)誤；
·含無(wú)核酶水、無(wú)反轉(zhuǎn)錄酶對(duì)照預(yù)混液。

NEB LunaScript反轉(zhuǎn)錄SuperMix預(yù)混液出色的靈敏度、線性關(guān)系和重復(fù)性 代理商北京澤平
圖. LunaScript反轉(zhuǎn)錄SuperMix預(yù)混液在兩步法RT-qPCR實(shí)驗(yàn)中展現(xiàn)了出色的靈敏度、線性關(guān)系和重復(fù)性。在20μl反應(yīng)體系中，使用1×LunaScript反轉(zhuǎn)錄SuperMix預(yù)混液，在標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)條件下（25℃/2min，55℃/10min，95℃/1min）將RNA轉(zhuǎn)錄為cDNA。然后將Luna通用qPCR預(yù)混液和1μl cDNA 作為模板，對(duì)cDNA進(jìn)行qPCR定量。每種起始量濃度做三個(gè)重復(fù)。
A. 將梯度稀釋的Jurkat總RNA（1μg~1pg）反轉(zhuǎn)錄為cDNA，然后通過(guò)qPCR對(duì)β-actin靶標(biāo)進(jìn)行定量。
B. ERCC（External RNA Controls Consortium）對(duì)照mix 1 RNA 包含50~5×109拷貝的ERCC00130（約10ng~10fg），反轉(zhuǎn)錄為cDNA后通過(guò)qPCR進(jìn)行定量。

NEBLunaScript反轉(zhuǎn)錄SuperMix預(yù)混液可覆蓋長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄本代理商北京澤平
圖. LunaScript反轉(zhuǎn)錄SuperMix預(yù)混液可覆蓋長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄本。設(shè)計(jì)八對(duì)引物覆蓋整個(gè)15.2kb HERC1 轉(zhuǎn)錄本。在20μl反應(yīng)體系中，使用1×LunaScript反轉(zhuǎn)錄SuperMix混合液，在標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)條件下（25℃/2min，55℃/10min，95℃/1min），將Jurkat總RNA（1μg~1ng）反轉(zhuǎn)錄為cDNA。然后將Luna通用qPCR預(yù)混液和1μl cDNA 產(chǎn)物作為模板，對(duì)cDNA覆蓋度進(jìn)行qPCR評(píng)估。每個(gè)靶標(biāo)的起始量濃度均做重復(fù)。

 
3、NEB LunaScript 反轉(zhuǎn)錄SuperMix預(yù)混液（逆轉(zhuǎn)錄預(yù)混液，LunaScript RT SuperMix，貨號(hào)M3010）相比LunaScript反轉(zhuǎn)錄SuperMix試劑盒，不含無(wú)反轉(zhuǎn)錄酶對(duì)照預(yù)混液和無(wú)核酶水。


4、NEB LunaScript 反轉(zhuǎn)錄預(yù)混液試劑盒（無(wú)引物） (逆轉(zhuǎn)錄試劑盒，LunaScript RT Master Mix Kit [Primer-free]，貨號(hào)E3025) 包含除引物外的合成cDNA第一鏈所需的所有組分，適用于RT-PCR、RNA-seq及其它應(yīng)用，與隨機(jī)引物、oligo dT 引物以及基因特異性引物兼容，讓cDNA合成更靈活。

·5×預(yù)混液提供Luna反轉(zhuǎn)錄酶、dNTP、小鼠RNase抑制劑；
·不含引物劑型可更靈活選擇引物，達(dá)到更佳cDNA合成效果；
·15min內(nèi)即可完成cDNA第一鏈合成；
·可用于cDNA第一鏈合成、兩步法RT-qPCR、兩步法RT-PCR、RNA-seq；
·包含無(wú)干擾、可視化藍(lán)色示蹤染料，減少加樣錯(cuò)誤；
·提供無(wú)反轉(zhuǎn)錄酶對(duì)照預(yù)混液，增加實(shí)驗(yàn)可信度。 

NEB LunaScript反轉(zhuǎn)錄預(yù)混液試劑盒（無(wú)引物）性能穩(wěn)健代理商北京澤平
圖. 在兩步法RT-qPCR定量中，LunaScript反轉(zhuǎn)錄預(yù)混液試劑盒（無(wú)引物）性能穩(wěn)健。
A. 使用隨機(jī)引物混合液和LunaScript 反轉(zhuǎn)錄預(yù)混液（無(wú)引物）對(duì)1µg~100pg RNA 進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，并進(jìn)行兩步法RT-qPCR檢測(cè)，結(jié)果顯示：與LunaScript一致，合成cDNA產(chǎn)量均展現(xiàn)出良好的線性度。
B. 對(duì)于常規(guī)轉(zhuǎn)錄本，使用d(T)23VN引物獲得的cDNA覆蓋度與隨機(jī)引物混合液一致。但對(duì)于長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄本（如SMG1），隨機(jī)引物混合液能更好地覆蓋靶基因5'端，右下角圖框所示RT-qPCR的靶基因位于SMG1（16kb）轉(zhuǎn)錄本的5'端。與隨機(jī)引物混合液（隨機(jī)六聚體引物和dT錨定引物的混合物）相比，單獨(dú)使用dT錨定引物[d(T)23VN]的Cq值延遲。

NEB lunaScript反轉(zhuǎn)錄預(yù)混液試劑盒（無(wú)引物）能夠合成各種長(zhǎng)度范圍cDNA代理商北京澤平
圖. 在常規(guī)PCR或高保真PCR中，LunaScript反轉(zhuǎn)錄預(yù)混液試劑盒（無(wú)引物）能夠合成各種長(zhǎng)度范圍cDNA。使用LunaScript反轉(zhuǎn)錄預(yù)混液試劑盒（無(wú)引物）將1µg Jurkat總RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA，引物為d(T)23VN，使用標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)條件55℃溫育10min，95℃溫育1min。之后使用不同PCR擴(kuò)增試劑對(duì)cDNA合成產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)于5kb以內(nèi)的常規(guī)應(yīng)用，建議使用NEB OneTaq 2X 預(yù)混液；如需高保真，建議使用NEB Q5 熱啟動(dòng)超保真2X預(yù)混液；如需長(zhǎng)片段PCR擴(kuò)增獲得更高產(chǎn)量，建議使用NEB LongAmp Taq 2X 預(yù)混液（數(shù)據(jù)未顯示）。


5、NEB LunaScript 一步法多重RT-PCR試劑盒（LunaScript Multiplex One-Step RT-PCR Kit，貨號(hào)E1555）為cDNA合成和PCR擴(kuò)增提供了簡(jiǎn)化方案。其中的5×反應(yīng)預(yù)混液含有dNTP，適用于多重靶標(biāo)檢測(cè)，操作便捷；25×酶預(yù)混液含有Luna WarmStart 反轉(zhuǎn)錄酶和Q5熱啟動(dòng)超高保真DNA聚合酶；核酸適配體可逆結(jié)合上述兩種酶，在低于45℃下抑制酶活，對(duì)兩種酶活進(jìn)行雙重溫控，支持在室溫下建立反應(yīng)體系，防止非特異性擴(kuò)增，預(yù)混體系可在室溫下穩(wěn)定保存24h。LunaScript一步法多重RT-PCR試劑盒具備強(qiáng)大的多重靶標(biāo)擴(kuò)增能力，適用于IVD、病原體檢測(cè)、病毒基因組測(cè)序等多種應(yīng)用。

·含Luna WarmStart 反轉(zhuǎn)錄酶和Q5熱啟動(dòng)超高保真DNA聚合酶；
·可檢測(cè)低至0.01pg的人總RNA；
·多重檢測(cè)能力適用于ARTIC測(cè)序方案；
·適配體允許室溫下建立反應(yīng)體系，防止非特異性擴(kuò)增，保持24h持久穩(wěn)定；
·在單獨(dú)的閉合試管中一步完成RT-PCR，節(jié)省時(shí)間、減少污染。
  
NEB LunaScript一步法多重RT-PCR試劑盒在單個(gè)RT-PCR反應(yīng)中進(jìn)行多重RNA靶標(biāo)檢測(cè)和鑒定 代理商北京澤平
圖. 在單個(gè)RT-PCR反應(yīng)中進(jìn)行多重RNA靶標(biāo)檢測(cè)和鑒定。LunaScript一步法多重RT-PCR試劑盒僅需添加RNA模板和基因特異性引物，即可在一次反應(yīng)中對(duì)多個(gè)cDNA靶標(biāo)進(jìn)行合成和擴(kuò)增。擴(kuò)增后的cDNA產(chǎn)物可通過(guò)下游應(yīng)用進(jìn)行檢測(cè)或鑒定，包括：二代測(cè)序、DNA芯片、片段分析、電泳和傳統(tǒng)的克隆/測(cè)序。

NEB LunaScript試劑可在室溫下放置長(zhǎng)達(dá)24h 代理商北京澤平
圖. LunaScript試劑可在室溫下放置長(zhǎng)達(dá)24h，在此期間RNA的檢測(cè)效果仍然靈敏和穩(wěn)定。使用LunaScript一步法多重RT-PCR試劑盒對(duì)GAPDH靶標(biāo)（570bp）進(jìn)行擴(kuò)增，樣品為0.01ng~10ng的Jurkat總RNA。反應(yīng)體系在冰上建立并立即運(yùn)行（對(duì)照）或在熱循環(huán)前在室溫下放置1h、4h、24h。每個(gè)溫育條件下都設(shè)有無(wú)模板對(duì)照（NTC）反應(yīng)。結(jié)果顯示：所有上樣量均完成了高度靈敏和特異的靶標(biāo)擴(kuò)增，預(yù)混體系在室溫下放置長(zhǎng)達(dá)24h后也達(dá)到了同樣的效果。

 

貨號(hào) E3010 M3010 E3025 E1555
名稱 LunaScript反轉(zhuǎn)錄SuperMix試劑盒 LunaScript反轉(zhuǎn)錄SuperMix預(yù)混液 LunaScript反轉(zhuǎn)錄預(yù)混液試劑盒(無(wú)引物) LunaScript一步法多重RT-PCR試劑盒
反轉(zhuǎn)錄酶 Luna反轉(zhuǎn)錄酶 Luna反轉(zhuǎn)錄酶 Luna反轉(zhuǎn)錄酶 Luna WarmStart 反轉(zhuǎn)錄酶
RNase H 活性 - - - -
RNase抑制劑 + + + +
引物 隨機(jī)六聚體引物、oligo-dT 隨機(jī)六聚體引物、oligo-dT - -
PCR預(yù)混液 - - - Q5 HotStart
無(wú)反轉(zhuǎn)錄酶對(duì)照預(yù)混液 + - + -
無(wú)核酸酶水 + - + +
應(yīng)用 兩步法RT-qPCR、多擴(kuò)增子測(cè)序 兩步法RT-qPCR、多擴(kuò)增子測(cè)序 兩步法RT-qPCR、多擴(kuò)增子測(cè)序 一步法RT-PCR、多擴(kuò)增子測(cè)序

 

NEB針對(duì)qPCR、RT-qPCR不同模板來(lái)源、檢測(cè)方法，提供經(jīng)優(yōu)化的多種Luna預(yù)混液、試劑盒產(chǎn)品。

 

模板 染料法 探針?lè)?/span>
基因組DNA、cDNA Luna通用qPCR預(yù)混液 M3003 Luna通用探針?lè)╭PCR預(yù)混液 M3004
純化RNA 一步法RT-qPCR Luna通用一步法RT-qPCR試劑盒 E3005 Luna通用探針一步法RT-qPCR試劑盒 D3006
  Luna探針一步法RT-qPCR試劑盒（無(wú) ROX） E3007
  Luna探針一步法RT-qPCR 4X 預(yù)混液，含UDG M3019
  Luna探針一步法RT-qPCR 4X 預(yù)混液，含UDG（無(wú)ROX） M3029
  LyoPrime Luna 探針一步法RT-qPCR預(yù)混凍干粉（含UDG） L4001
兩步法RT-qPCR LunaScript反轉(zhuǎn)錄SuperMix E3010/M3010 LunaScript反轉(zhuǎn)錄SuperMix E3010/M3010
+ +
Luna通用qPCR預(yù)混液 M3003 Luna通用探針?lè)╭PCR預(yù)混液 M3004
細(xì)胞裂解RNA Luna Cell Ready 一步法RT-qPCR試劑盒 E3030 Luna Cell Ready 探針一步法RT-qPCR試劑盒 E3031


  


二、Induro反轉(zhuǎn)錄酶——RNA直接測(cè)序、長(zhǎng)片段cDNA測(cè)序、復(fù)雜模板

NEB Induro 反轉(zhuǎn)錄酶（Induro逆轉(zhuǎn)錄酶，Induro Reverse Transcriptase，貨號(hào)M0681）是由II型內(nèi)含子編碼的反轉(zhuǎn)錄酶，在RNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA過(guò)程中，展示出更強(qiáng)的持續(xù)合成能力、更強(qiáng)的熱穩(wěn)定性，以及抑制劑耐受能力，特別適合長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄本、復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)，以及含有抑制成分樣品。Induro反轉(zhuǎn)錄酶提升了長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄本的5'端測(cè)序覆蓋度，適用于RNA-seq，如RNA直接測(cè)序、長(zhǎng)讀長(zhǎng)cDNA測(cè)序。

·反轉(zhuǎn)錄延伸能力強(qiáng)，可擴(kuò)增超過(guò)20kb；
·速度快，5min內(nèi)合成>12b cDNA 全長(zhǎng)產(chǎn)物；
·熱穩(wěn)定性更強(qiáng)，55℃~60℃高溫條件下合成cDNA更穩(wěn)定；
·強(qiáng)大的抑制劑耐受能力，耐KCI、NaCI、MgCl、福爾馬林、煤油、吐溫20、乙醇、異丙醇、DMSO等，使cDNA合成更穩(wěn)定；
·與源自逆轉(zhuǎn)錄病毒的反轉(zhuǎn)錄酶保真度相當(dāng)；
·跨越修飾核苷酸能力，適用于直接RNA測(cè)序、長(zhǎng)讀長(zhǎng)cDNA測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程。

NEB Induro反轉(zhuǎn)錄酶的持續(xù)合成能力強(qiáng)，能夠快速高效合成cDNA 代理商北京澤平
圖. Induro反轉(zhuǎn)錄酶的持續(xù)合成能力強(qiáng)，能夠快速高效合成cDNA。Induro反轉(zhuǎn)錄酶能夠在55℃條件下，5min內(nèi)合成12kb cDNA 全長(zhǎng)產(chǎn)物。以體外轉(zhuǎn)錄獲得的不同長(zhǎng)度的poly(A) RNA 作為模板（1kb、4kb、8kb、12kb），驗(yàn)證全長(zhǎng)cDNA反轉(zhuǎn)錄效果。首先合成cDNA第一鏈，隨后用NaOH水解RNA鏈，將cDNA產(chǎn)物等分，分別加入5'特異性引物合成全長(zhǎng)雙鏈cDNA。最后，在瓊脂糖凝膠上加入等體積的雙鏈cDNA產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)。

NEB Induro反轉(zhuǎn)錄酶熱穩(wěn)定性強(qiáng)大，能夠在更高反應(yīng)溫度下穩(wěn)定合成 代理商北京澤平
圖. Induro反轉(zhuǎn)錄酶熱穩(wěn)定性強(qiáng)大，能夠在更高反應(yīng)溫度下穩(wěn)定合成。Induro反轉(zhuǎn)錄酶能夠在45℃~60℃條件下，10min內(nèi)合成12kb cDNA 全長(zhǎng)產(chǎn)物。以體外轉(zhuǎn)錄獲得的不同長(zhǎng)度的poly(A) RNA 作為模板（1kb、4kb、8kb、12kb），驗(yàn)證全長(zhǎng)cDNA的合成效果。首先合成cDNA第一鏈，隨后用NaOH水解RNA鏈，將cDNA產(chǎn)物等分，分別加入5'特異性引物合成全長(zhǎng)雙鏈cDNA。最后，在瓊脂糖凝膠上加入等體積的雙鏈cDNA產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)。

NEB Induro反轉(zhuǎn)錄酶能夠以復(fù)雜的人RNA為模板，反轉(zhuǎn)錄合成長(zhǎng)片段cDNA 代理商北京澤平
圖. Induro反轉(zhuǎn)錄酶能夠以復(fù)雜的人RNA為模板，反轉(zhuǎn)錄合成長(zhǎng)片段cDNA。Induro反轉(zhuǎn)錄酶以人總RNA為模板，分別在50℃、55℃、60℃條件下，經(jīng)10min溫育，合成超過(guò)14kb的cDNA產(chǎn)物。cDNA第一鏈合成后，將產(chǎn)物等分，使用NEB LongAmp Taq 2X 預(yù)混液進(jìn)行PCR。

 

 
三、Protoscript II 反轉(zhuǎn)錄酶——常規(guī)RT-PCR、RT-qPCR、RNA-seq

1、NEB Protoscript II 反轉(zhuǎn)錄酶（Protoscript II 逆轉(zhuǎn)錄酶，ProtoScript II Reverse Transcriptase，貨號(hào)M0368）是一種重組M-MuLV反轉(zhuǎn)錄酶，具有非常低的RNase H 活性，避免長(zhǎng)RNA模板過(guò)早降解，增強(qiáng)的熱穩(wěn)定性，可在比野生型M-MuLV更高的溫度下（48°C）合成cDNA第一鏈。Protoscript II 反轉(zhuǎn)錄酶提供更高的特異性、更高的cDNA產(chǎn)量、長(zhǎng)達(dá)12kb的全長(zhǎng)cDNA產(chǎn)物。

·重組M-MuLV反轉(zhuǎn)錄酶；
·非常低的RNase H 活性；
·提高熱穩(wěn)定性，在高達(dá)48℃時(shí)仍有活性。

NEB ProtoScript II 逆轉(zhuǎn)錄酶即使起始RNA量非常少，也能生成高質(zhì)量的cDNA 代理商北京澤平
圖. 即使起始RNA量非常少，也能生成高質(zhì)量的cDNA。使用遞減量的Jurkat總RNA（1μg~1pg）和200units的NEB ProtoScript II 逆轉(zhuǎn)錄酶合成cDNA第一鏈（20μl體系），反應(yīng)物在42°C下孵育50min，然后在80°C下熱滅活5min。使用LongAmp Taq 預(yù)混液將1μl cDNA 用于25μl體系PCR中，進(jìn)行40個(gè)循環(huán)。靶標(biāo)是GAPDH的0.6kb片段。Marker是NEB 2-Log DNA Ladder。

NEB ProtoScript II 逆轉(zhuǎn)錄酶即使較長(zhǎng)的模板，也能穩(wěn)定合成cDNA 代理商北京澤平
圖. 即使較長(zhǎng)的模板，也能穩(wěn)定合成cDNA。使用200units NEB ProtoScript II 逆轉(zhuǎn)錄酶合成Jurkat總RNA（1μg）的cDNA第一鏈（20μl體系）。反應(yīng)物在42°C下孵育50min，然后80°C下熱滅活5min。使用NEB LongAmp Taq 預(yù)混液將1μl cDNA 用于25μl PCR 中，進(jìn)行35~40個(gè)循環(huán)。大小如凝膠上方所示。 


2、NEB ProtoScript II cDNA 第一鏈合成試劑盒（ProtoScript II First Strand cDNA Synthesis Kit，貨號(hào)E6560）含有經(jīng)優(yōu)化的ProtoScript II 酶預(yù)混液、ProtoScript II 反應(yīng)預(yù)混液、Oligo-dT引物、隨機(jī)引物、無(wú)核酸酶的水，可提高cDNA的特異性和產(chǎn)量。酶預(yù)混液含ProtoScript II 反轉(zhuǎn)錄酶、小鼠RNase抑制劑；反應(yīng)預(yù)混液含dNTP、經(jīng)優(yōu)化的緩沖液；Oligo-dT引物[d(T)23VN]能與polyA尾的起始端退火；經(jīng)優(yōu)化的隨機(jī)引物混合液能隨機(jī)并持續(xù)性地與整個(gè)RNA模板配對(duì)，包括mRNA與無(wú)polyA尾的RNA。ProtoScript II 反轉(zhuǎn)錄酶降低了RNase H 活性，提高了熱穩(wěn)定性，可在高達(dá)48℃的溫度下合成cDNA第一鏈，相比野生型具備更高特異性、更高cDNA產(chǎn)量，合成的cDNA第一鏈產(chǎn)物可達(dá)10kb。

·重組M-MuLV反轉(zhuǎn)錄酶，降低了RNase H 活性，提高了熱穩(wěn)定性（高達(dá)48℃時(shí)仍有活性）；
·可合成長(zhǎng)達(dá)10kb的cDNA；
·含Oligo-dT引物、隨機(jī)引物混合液、無(wú)核酸酶水。

NEB ProtoScript II cDNA第一鏈合成試劑盒代理商北京澤平
圖. 使用ProtoScript II cDNA 第一鏈合成試劑盒對(duì)JurkatRNA進(jìn)行cDNA合成。42℃條件下，使用1× ProtoScript II 反應(yīng)混合液和1× ProtoScript II 酶混合液，以250ng Jurkat 細(xì)胞總RNA，合成cDNA第一鏈。使用NEB LongAmp Taq 2X 預(yù)混液，擴(kuò)增來(lái)自不同基因的四個(gè)擴(kuò)增子。泳道1為來(lái)自SDHA基因的1.9kb擴(kuò)增子；泳道2為來(lái)自鳥(niǎo)嘌呤核苷酸交換因子的5.5kb擴(kuò)增子；泳道3為來(lái)自Xrn-1基因的7.3kb擴(kuò)增子；泳道4為來(lái)自原纖維蛋白基因的9.2kb擴(kuò)增子。DNA Marker M 為1kb Plus DNA Ladder。

 


四、WarmStart RTx 反轉(zhuǎn)錄酶——RT-LAMP

NEB WarmStart RTx 反轉(zhuǎn)錄酶（WarmStart RTx 逆轉(zhuǎn)錄酶，WarmStart RTx Reverse Transcriptase，貨號(hào)M0380）是一種由計(jì)算機(jī)設(shè)計(jì)的以RNA為模板的DNA聚合酶，具有完整的RNase H 活性，可使用RNA（cDNA合成）或單鏈DNA作為模板，通過(guò)引物合成互補(bǔ)的DNA鏈，專業(yè)用于擴(kuò)增反應(yīng)中RNA檢測(cè)，特別適合環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增LAMP。WarmStart技術(shù)添加可逆結(jié)合的適配體，可在40°C以下抑制反轉(zhuǎn)錄酶活性，實(shí)現(xiàn)室溫構(gòu)建反應(yīng)體系，提高結(jié)果一致性和特異性。另提供無(wú)甘油、凍干形式，用于微流控設(shè)備，實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化工作流程。

·環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增LAMP的理想選擇；
·WarmStart溫啟動(dòng)技術(shù)有助于在室溫下、高通量建立反應(yīng)體系，提高擴(kuò)增反應(yīng)的一致性和特異性。

NEB WarmStart RTx 反轉(zhuǎn)錄酶提高RT-LAMP的速度和靈敏度代理商北京澤平
圖. 提高RT-LAMP的速度和靈敏度。將NEB Bst 2.0 WarmStart DNA 聚合酶和WarmStart RTx 反轉(zhuǎn)錄酶在65°C下與1pg~100ng Jurkat 總RNA一起孵育。用實(shí)時(shí)熒光監(jiān)測(cè)反應(yīng)，所得曲線顯示在左邊，相應(yīng)的閾值時(shí)間顯示在右邊。WarmStart RTx 提供更短的反應(yīng)閾值時(shí)間，能以較低的RNA起始量，獲得更高一致性和靈敏度。而使用AMV逆轉(zhuǎn)錄酶進(jìn)行的RT-LAMP反應(yīng)結(jié)果不一致，如較低RNA起始濃度下發(fā)生巨大變化（藍(lán)色曲線）。

NEB WarmStart RTx 的溫啟動(dòng)控制代理商北京澤平
圖. WarmStart RTx 的溫啟動(dòng)控制。進(jìn)行cDNA合成10min，然后進(jìn)行qPCR分析。根據(jù)0%活性的“無(wú)反轉(zhuǎn)錄酶”對(duì)照和100%活性的最快Ct對(duì)所得Cts進(jìn)行歸一化。WarmStart RTx 在低于40°C的溫度下被可逆結(jié)合的適配體抑制。

 


五、M-MuLV反轉(zhuǎn)錄酶——常規(guī)RT-PCR

NEB M-MuLV 反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV逆轉(zhuǎn)錄酶，M-MuLV Reverse Transcriptase，MMLV，貨號(hào)M0253）是重組來(lái)源的莫洛尼氏鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶，能以RNA（合成cDNA時(shí)）或單鏈DNA為模板，由引物起始，合成一條互補(bǔ)的DNA鏈，該重組酶通過(guò)基因工程改造在N端產(chǎn)生16個(gè)額外的氨基酸，在C端產(chǎn)生13個(gè)氨基酸，具備了RNase H 功能，無(wú)3'→5'核酸外切酶活性。

·重組來(lái)源；
·隨酶附10×反應(yīng)緩沖液；
·不含DNase、RNase。

 


六、AMV反轉(zhuǎn)錄酶——常規(guī)RT-PCR

NEB AMV 反轉(zhuǎn)錄酶（AMV Reverse Transcriptase，貨號(hào)M0277），即禽骨髓母細(xì)胞瘤病毒（AMV）逆轉(zhuǎn)錄酶，能以RNA（合成cDNA）或單鏈DNA為模板，由引物起始，合成一條互補(bǔ)的DNA鏈。

·RT-PCR、cDNA合成、RNA測(cè)序的理想選擇；
·10×反應(yīng)緩沖液可為cDNA第一鏈和第二鏈的穩(wěn)定合成提供更佳反應(yīng)條件。

 

 
NEB反轉(zhuǎn)錄酶選擇表

 

反轉(zhuǎn)錄酶 擴(kuò)增長(zhǎng)度 活性溫度 熱失活 RNase H 活性 cDNA 3'加adaptor 應(yīng)用
AMV反轉(zhuǎn)錄酶 5kb 37°C~52°C 85°C/5min + 未測(cè)試 常規(guī)RT-PCR
M-MuLV反轉(zhuǎn)錄酶 7kb 37°C~45°C 65°C/20min + +
ProtoScript II 反轉(zhuǎn)錄酶 12kb 37°C~48°C 80°C/5min - - 常規(guī)RT-PCR / RT-qPCR / RNA-seq
Luna反轉(zhuǎn)錄酶 3kb 55°C~65°C 95°C/1min - - RT-qPCR / 擴(kuò)增子測(cè)序
WarmStart RTx 反轉(zhuǎn)錄酶 5kb 45°C~65°C 80°C/10min + - RT-LAMP
模板置換反轉(zhuǎn)錄酶混合液 10~12kb 37°C~48°C 85°C/5min - +++ RNA-seq /5'RACE / 二鏈合成
Induro反轉(zhuǎn)錄酶 >20kb 45°C~60°C 95°C/1min - -
RNA直接測(cè)序 / 長(zhǎng)片段cDNA測(cè)序 / 困難模板


 

 
北京澤平代理的NEB反轉(zhuǎn)錄酶和qPCR/RT-qPCR相關(guān)產(chǎn)品

 

貨號(hào) 英文名稱 中文名稱 包裝規(guī)格
M0277L AMV Reverse Transcriptase - 1000 units AMV 反轉(zhuǎn)錄酶 1,000 units
M0277S AMV Reverse Transcriptase - 200 units AMV 反轉(zhuǎn)錄酶 200 units
M0681L Induro Reverse Transcriptase - 10000 units Induro 反轉(zhuǎn)錄酶 10,000 units
M0681S Induro Reverse Transcriptase - 4000 units Induro 反轉(zhuǎn)錄酶 4,000 units
E3032S Luna Cell Ready Lysis Module - 100 reactions Luna Cell Ready 裂解模塊 100 rxns
E3031S Luna Cell Ready Probe One-Step RT-qPCR Kit - 100 reactions Luna Cell Ready 探針一步法 RT-qPCR 試劑盒 100 rxns
E3030S Luna Cell Ready One-Step RT-qPCR Kit - 100 reactions Luna Cell Ready 一步法 RT-qPCR 試劑盒 100 rxns
E3019L Luna SARS-CoV-2 RT-qPCR Multiplex Assay Kit - 480 reactions Luna SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 檢測(cè)試劑盒 480 rxns
E3019S Luna SARS-CoV-2 RT-qPCR Multiplex Assay Kit - 96 reactions Luna SARS-CoV-2 多重 RT-qPCR 檢測(cè)試劑盒 96 rxns
M3019X Luna Probe One-Step RT-qPCR 4X Mix with UDG - 1000 reactions Luna 探針一步法 RT-qPCR 4X 預(yù)混液（含 UDG） 1000 rxns
M3019S Luna Probe One-Step RT-qPCR 4X Mix with UDG - 200 reactions Luna 探針一步法 RT-qPCR 4X 預(yù)混液（含 UDG） 200 rxns
M3019E Luna Probe One-Step RT-qPCR 4X Mix with UDG - 2000 reactions Luna 探針一步法 RT-qPCR 4X 預(yù)混液（含 UDG） 2000 rxns
M3019L Luna Probe One-Step RT-qPCR 4X Mix with UDG - 500 reactions Luna 探針一步法 RT-qPCR 4X 預(yù)混液（含 UDG） 500 rxns
M3029S Luna Probe One-Step RT-qPCR 4X Mix with UDG (No ROX) | - 200 reactions Luna 探針一步法 RT-qPCR 4X 預(yù)混液，含 UDG（無(wú) ROX） 200 rxns      
M3029E Luna Probe One-Step RT-qPCR 4X Mix with UDG (No ROX) || - 2000 reactions Luna 探針一步法 RT-qPCR 4X 預(yù)混液，含 UDG（無(wú) ROX） 2000 rxns     
M3029L Luna Probe One-Step RT-qPCR 4X Mix with UDG (No ROX) - 500 reactions Luna 探針一步法 RT-qPCR 4X 預(yù)混液，含 UDG（無(wú) ROX） 500 rxns      
E3007E Luna Probe One-Step RT-qPCR Kit (No ROX) - 2500 reactions Luna 探針一步法 RT-qPCR 試劑盒（無(wú) ROX） 2,500 rxns
M3003X Luna Universal qPCR Master Mix - 1000 reactions Luna 通用 qPCR 預(yù)混液 1,000 rxns
M3003V Luna Universal qPCR Master Mix - 100 rxns   Luna 通用 qPCR 預(yù)混液 100 rxns  
M3003S Luna Universal qPCR Master Mix - 200 reactions Luna 通用 qPCR 預(yù)混液 200 rxns
M3003E Luna Universal qPCR Master Mix - 2500 reactions Luna 通用 qPCR 預(yù)混液 2500 rxns
M3003L Luna Universal qPCR Master Mix - 500 reactions Luna 通用 qPCR 預(yù)混液 500 rxns
M3004V Luna Universal Probe qPCR Master Mix - 100 rxns   Luna 通用探針?lè)?qPCR 預(yù)混液 100 rxns  
M3004X Luna Universal Probe qPCR Master Mix - 1000 reactions Luna 通用探針?lè)?qPCR 預(yù)混液 1000 rxns
M3004S Luna Universal Probe qPCR Master Mix - 200 reactions Luna 通用探針?lè)?qPCR 預(yù)混液 200 rxns
M3004E Luna Universal Probe qPCR Master Mix - 2500 reactions Luna 通用探針?lè)?qPCR 預(yù)混液 2500 rxns
M3004L Luna Universal Probe qPCR Master Mix - 500 reactions Luna 通用探針?lè)?qPCR 預(yù)混液 500 rxns
E3006X Luna Universal Probe One-Step RT-qPCR Kit - 1000 reactions Luna 通用探針一步法 RT-qPCR 試劑盒 1000 rxns
E3006S Luna Universal Probe One-Step RT-qPCR Kit - 200 reactions Luna 通用探針一步法 RT-qPCR 試劑盒 200 rxns
E3006E Luna Universal Probe One-Step RT-qPCR Kit - 2500 reactions Luna 通用探針一步法 RT-qPCR 試劑盒 2500 rxns
E3006L Luna Universal Probe One-Step RT-qPCR Kit - 500 reactions Luna 通用探針一步法 RT-qPCR 試劑盒 500 rxns
E3005X Luna Universal One-Step RT-qPCR Kit - 1000 reactions Luna 通用一步法 RT-qPCR 試劑盒 1000 rxns
E3005S Luna Universal One-Step RT-qPCR Kit - 200 reactions Luna 通用一步法 RT-qPCR 試劑盒 200 rxns
E3005E Luna Universal One-Step RT-qPCR Kit - 2500 reactions Luna 通用一步法 RT-qPCR 試劑盒 2500 rxns
E3005L Luna Universal One-Step RT-qPCR Kit - 500 reactions Luna 通用一步法 RT-qPCR 試劑盒 500 rxns
E3010L LunaScript RT SuperMix Kit - 100 reactions LunaScript 反轉(zhuǎn)錄 SuperMix 試劑盒 100 rxns 
E3010S LunaScript RT SuperMix Kit - 25 reactions LunaScript 反轉(zhuǎn)錄 SuperMix 試劑盒 25 rxns
E3025L LunaScript RT Master Mix (Primer-free) Kit - 100 reactions LunaScript 反轉(zhuǎn)錄預(yù)混液試劑盒（無(wú)引物） 100 rxn
E3025S LunaScript RT Master Mix (Primer-free) Kit - 25 reactions LunaScript 反轉(zhuǎn)錄預(yù)混液試劑盒（無(wú)引物） 25 rxn
E1555L LunaScript Multiplex One-Step RT-PCR Kit - 250 reactions LunaScript 一步法多重 RT-PCR 試劑盒 250 rxns
E1555S LunaScript Multiplex One-Step RT-PCR Kit - 50 reactions LunaScript 一步法多重 RT-PCR 試劑盒 50 rxns
M3010L LunaScript RT SuperMix - 100 reactions LunaScript 反轉(zhuǎn)錄 SuperMix 預(yù)混液 100 rxns      
M3010E LunaScript RT SuperMix - 2500 reactions LunaScript 反轉(zhuǎn)錄 SuperMix 預(yù)混液 2500 rxns   
M3010X LunaScript RT SuperMix - 500 reactions LunaScript 反轉(zhuǎn)錄 SuperMix 預(yù)混液 500 rxns     
L4001S LyoPrime Luna Probe One-Step RT-qPCR Mix with UDG - 120 reactions LyoPrime Luna 探針一步法 RT-qPCR 預(yù)混凍干粉（含 UDG） 120 rxns
L4001P LyoPrime Luna Probe One-Step RT-qPCR Mix with UDG - 96 reactions LyoPrime Luna 探針一步法 RT-qPCR 預(yù)混凍干粉（含 UDG） 96 rxns
M0253S M-MuLV Reverse Transcriptase - 10000 units M-MulV 反轉(zhuǎn)錄酶 10,000 units
M0253L M-MuLV Reverse Transcriptase - 50000 units M-MulV 反轉(zhuǎn)錄酶 50,000 units
S1316S Oligo d(T)₁₈ mRNA Primer - 5 A260 units Oligo d(T)18 mRNA 引物 5.0 A260 units
S1327S Oligo d(T)23VN - 1 A260 units Oligo d(T)23 VN 1.0 A260 units
E5310S OneTaq RT-PCR Kit - 30 reactions OneTaq RT-PCR 試劑盒 30 rxns
E5315S OneTaq One-Step RT-PCR Kit - 30 reactions OneTaq 一步法 RT-PCR 試劑盒 30 rxns
E6300L ProtoScript First Strand cDNA Synthesis Kit - 150 reactions ProtoScript cDNA 第一鏈合成試劑盒 150 rxns
E6300S ProtoScript First Strand cDNA Synthesis Kit - 30 reactions ProtoScript cDNA 第一鏈合成試劑盒 30 rxns
E6560L ProtoScript II First Strand cDNA Synthesis Kit - 150 reactions ProtoScript II cDNA 第一鏈合成試劑盒 150 rxns
E6560S ProtoScript II First Strand cDNA Synthesis Kit - 30 reactions ProtoScript II cDNA 第一鏈合成試劑盒 30 rxns
M0368L ProtoScript II Reverse Transcriptase - 10000 units ProtoScript II 反轉(zhuǎn)錄酶 10,000 units
M0368S ProtoScript II Reverse Transcriptase - 4000 units ProtoScript II 反轉(zhuǎn)錄酶 4,000 units
M0368X ProtoScript II Reverse Transcriptase - 40000 units ProtoScript II 反轉(zhuǎn)錄酶 40,000 units
M0380L WarmStart RTx Reverse Transcriptase - 250 reactions WarmStart RTx 反轉(zhuǎn)錄酶 250 rxns
M0380S WarmStart RTx Reverse Transcriptase - 50 reactions WarmStart RTx 反轉(zhuǎn)錄酶 50 rxns
M0439L WarmStart RTx Reverse Transcriptase (Glycerol-free) - 2000 units WarmStart RTx 反轉(zhuǎn)錄酶（無(wú)甘油） 2000 units
M0466L Template Switching RT Enzyme Mix - 100 reactions 模板置換反轉(zhuǎn)錄酶混合液 100 rxns
M0466S Template Switching RT Enzyme Mix - 20 reactions 模板置換反轉(zhuǎn)錄酶混合液 20 rxns
S1330S Random Primer Mix - 100 µl 隨機(jī)引物混合液 100 µl (60 µM)
S1230S Random Primer 6 - 1 A260 units 6 堿基隨機(jī)引物 1.0 A260 units
S1254S Random Primer 9 - 1 A260 units 9 堿基隨機(jī)引物 1.0 A260 units


 
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