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NEB三代測序解決方案

 
北京澤平代理美國進口New England Biolabs (NEB) 品牌三代測序建庫試劑盒，用于Oxford Nanopore、Pacbio三代測序儀，提供包括高分子量DNA提取試劑盒、cDNA合成試劑盒/RNA反轉(zhuǎn)錄酶、Q5超高保真DNA聚合酶預(yù)混液等各類三代測序文庫構(gòu)建試劑盒。NEB文庫制備試劑盒性能優(yōu)越，質(zhì)量穩(wěn)定，為Oxford Nanopore Technologies 官方推薦產(chǎn)品。

NEB三代測序相關(guān)試劑產(chǎn)品豐富，滿足人基因組 、微生物基因組 、擴增子、表觀基因組、轉(zhuǎn)錄組的全方位測序需求。
 


 
一、樣本提取

1、Monarch高分子量（HMW）DNA提取試劑盒，突破長讀長測序應(yīng)用的瓶頸。
·快速且簡便的工作流程（細胞：30min，血液：60min，組織/細胞：90min），支持在同一天完成從樣本到測序的全流程；  
·可以從細胞、血液、軟器官組織和細菌中獲得Mb級別的超高分子量DNA（UHMW DNA）；
·DNA片段大小可通過裂解過程中的攪拌速率進行調(diào)節(jié)。使用靈活，可以根據(jù)測序需求進行優(yōu)化。


圖. 從細胞樣本中提取高分子量DNA只需30min。


 2、Monarch基因組DNA提取試劑盒
·分離出的DNA片段長度可超過50kb；
·高度完整的DNA片段，具有非常高的產(chǎn)量和純度；
·對多種樣本類型進行了應(yīng)用驗證。

 

 
二、微生物DNA富集

NEBNext微生物DNA富集試劑盒
·從污染的宿主DNA中高效富集微生物DNA，捕獲的宿主DNA也可洗脫并保留；
·適合各種樣本類型，無需活細胞。

 
 

三、全基因組擴增

phi29-XT RCA（循環(huán)擴增）試劑盒
·包含phi29-XT DNA 聚合酶，經(jīng)基因工程改造，可在較短反應(yīng)時間內(nèi)獲得高質(zhì)量的產(chǎn)物，并提高熱穩(wěn)定性和靈敏度；
·擴增可從低至1fg的環(huán)狀DNA起始；
·靈活的操作方案適用于不同類型的起始樣本；
·支持多個下游應(yīng)用，無需進一步處理步驟；
·試劑盒包含dNTPs和外切酶抗性的隨機引物。


圖. phi29-XT RCA（滾環(huán)擴增）試劑盒概覽。phi29-XT RCA（滾環(huán)擴增）試劑盒是一種快速、使用簡單、用途廣泛的試劑盒。該試劑盒中包含使用隨機引物混合物進行滾環(huán)擴增（RCA）所需的全部試劑。該試劑盒可從純化的環(huán)狀DNA或細菌細胞等多種起始樣本獲得高得率的DNA產(chǎn)物。該試劑盒應(yīng)用廣泛，可用于DNA測序、無細胞DNA富集、無細胞蛋白表達和DNA生物傳感器。


圖. phi29-XT RCA（滾環(huán)擴增）試劑盒可有效擴增低至1fg pUC19 DNA。沒有模板（NTC）或使用1fg pUC19 質(zhì)粒的條件下，使用phi29-XT RCA（滾環(huán)擴增）試劑盒在42℃下進行2h的RCA反應(yīng)，平行重復(fù)反應(yīng)四次，使用NEB AclI酶消化反應(yīng)產(chǎn)物，該酶將特異性切割質(zhì)粒序列以產(chǎn)生兩個片段（373bp和2313bp），并使用瓊脂糖凝膠電泳驗證擴增成功性。phi29-XT DNA 聚合酶可在2h內(nèi)高效擴增1fg的2.7kb環(huán)狀質(zhì)粒DNA。

 


四、cDNA合成&擴增

1、NEBNext單細胞/超低起始量cDNA合成&擴增模塊
·從單個細胞或2pg~200ng的總RNA制備更高產(chǎn)量、更高質(zhì)量的全長轉(zhuǎn)錄本測序文庫；
·單管完成從細胞裂解到cDNA的全部實驗流程，減少了操作步驟和手動操作時間。


2、Induro反轉(zhuǎn)錄酶
·反轉(zhuǎn)錄延伸能力強，可快速獲得大量長片段cDNA；
·強大的抑制劑耐受能力，使cDNA合成更穩(wěn)定；
·適用于RNA直接測序和長片段cDNA測序；
·熱穩(wěn)定性更強，高溫條件下合成cDNA更穩(wěn)定；
·與源自逆轉(zhuǎn)錄病毒的反轉(zhuǎn)錄酶保真度相當。


3、LunaScript反轉(zhuǎn)錄SuperMix試劑盒
·熱穩(wěn)定的Luna反轉(zhuǎn)錄酶，可在更高溫度下合成cDNA，可用于困難模板；
·反應(yīng)快速（<5min）；
·總RNA起始量從高達1μg到低至單拷貝RNA，均能得到穩(wěn)定、線性和靈敏的檢測結(jié)果。


4、ProtoScript II 反轉(zhuǎn)錄酶
·不同起始量的RNA均能高效反轉(zhuǎn)錄；
·提高熱穩(wěn)定性；
·合成至少10kb長度的cDNA。

 


五、擴增子測序

1、LongAmp熱啟動Taq 2X 預(yù)混液
·Taq和Deep Vent DNA 聚合酶優(yōu)化組合；
·更高的保真度；
·更長的PCR產(chǎn)物。


2、Q5熱啟動超保真2X預(yù)混液
·超高保真性 ：約為Taq酶的280倍，提供非常優(yōu)秀的擴增保真度；
·超強擴增能力：幾乎無需優(yōu)化，適用于各種模板，并滿足高特異性和高產(chǎn)量需求；
·無懼高GC：普通DNA聚合酶難以擴增高GC或高AT的樣品，Q5支持擴增更寬的模板范圍；  
·PCR時間更短：擴增精確度高，且擴增速度快。Q5融合了Sso7d DNA 結(jié)合域，增強持續(xù)合成能力，并減少延伸時間，延伸速度可達10秒/kb。此外，基于核酸適配體的熱啟動方式，無需額外的高溫激活步驟， 支持室溫建立體系。  
·擴增產(chǎn)物長達20kb：Q5可高效擴增高達20kb的簡單模板，或10kb的復(fù)雜模板 。  

 

 
六、甲基化建庫

NEBNext甲基化建庫酶學(xué)轉(zhuǎn)化法模塊
·酶學(xué)轉(zhuǎn)化法可更大限度減少DNA損傷，避免重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化導(dǎo)致的DNA斷裂、丟失和GC偏嗜；
·轉(zhuǎn)化效率高，GC偏嗜性小，提供更優(yōu)秀的5-mC和5-hmC檢測靈敏性。

 

 

七、文庫制備

NEBNext連接測序配套模塊
Oxford Nanopore Technologies 推薦了眾多NEBNext和NEB產(chǎn)品，以用于Oxford Nanopore 測序平臺不同樣本類型和不同應(yīng)用的文庫制備流程，新推薦的NEBNext連接測序配套模塊（貨號E7180）同時包含了以前推薦三個模塊（NEBNext FFPE DNA 修復(fù)混合液、NEBNext Ultra II 未端修復(fù)/加dA尾模塊、NEBNext快速連接模塊），使用更加方便。同時該模塊已為Oxford Nanopore Technologies 連接測序試劑盒（SQK-LSK109、SQK-LSK110和SQK-LSK114）的多個操作流程優(yōu)化了體積，使連接酶量翻倍，沒有多余的緩沖液或過量的試劑。

Oxford Nanopore Technologies 官方推薦網(wǎng)址
https://store.nanoporetech.net/native-barcoding-kit-96-v14.html
https://store.nanoporetech.net/multiplex-ligation-sequencing-kit-xl-v14.html
https://store.nanoporetech.net/ligation-sequencing-kit-v14.html

NEBNext連接測序配套模塊組分體積比較

優(yōu)勢
·Oxford Nanopore Technologies 官方推薦配套文庫制備產(chǎn)品；
·連接酶量翻倍，為Nanopore連接測序試劑盒（SQK-LSK109、SQK-LSK110和SQK-LSK114）進行了組分體積的優(yōu)化；
·杜絕浪費，沒有多余的緩沖液或過量的試劑；
·適用于所有Nanopore測序儀：MinION、GridION、PromethION、Floungle。

 

北京澤平代理的NEB三代測序相關(guān)試劑
 

 
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——NEB一級代理商，北京澤平